細胞培養**污染定性熒光檢測試劑盒-產品說明書中文版
技術背景
細胞培養**污染定性熒光檢測試劑盒-產品說明書中文版
細胞培養中的主要微生物污染包括支原體（mycoplasma）、**、**、酵母和病毒等。在含有***的培養液中，低水平的**污染則難以觀察和發現。SYTO-9染料為一種自由穿透質膜，并特異性結合核酸的熒光染料，一旦結合，呈現強力的綠色熒光。細胞培養**污染定性熒光染色技術，通過SYTO-9對**核酸的染色，替代**培養技術，具有快速檢測細胞培養中**的存在，在熒光顯微鏡下（激發波長485nm，散發波長500nm）下觀察到綠色點狀（dots）或桿狀（rods）。
細胞培養**污染定性熒光檢測試劑盒-產品說明書中文版
產品內容
細胞培養**污染定性熒光檢測試劑盒-產品說明書中文版
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B） 微升
HEPENGBIO稀釋液（Reagent C） 毫升
產品說明書 1份
細胞培養**污染定性熒光檢測試劑盒-產品說明書中文版
保存方式
保存在-20℃冰箱里，避免光照；有效保證6月
用戶自備
細胞培養**污染定性熒光檢測試劑盒-產品說明書中文版
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
載玻片和蓋玻片：用于樣品染色的載體
臺式離心機：用于懸浮細胞操作
細胞培養板或培養皿：用于培養細胞的容器
熒光顯微鏡：用于觀察熒光染情況
實驗步驟
實驗開始前，將-20的試劑置于室溫下凍融。然后移取xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到1.5毫升離心管，加入xx微升HEPENGBIO稀釋液（Reagent C），混勻后，標記為HEPENGBIO染色工作液，放進暗室里備用。
一、 貼壁細胞培養檢測
細胞培養**污染定性熒光檢測試劑盒-產品說明書中文版
1． 準備好待測細胞培養至50％鋪滿率
2． 小心移取5毫升細胞培養容器里的培養液到15毫升錐形離心管
3． 放進臺式離心機離心15分鐘，速度為1000g
4． 小心抽掉上清液
5． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
6． 放進臺式離心機離心15分鐘，速度為1000g
7． 小心抽掉上清液
8． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻
9． 移取20微升混勻液到潔凈的載玻片上
10． 放進37培養箱孵育10分鐘，使其晾干
11． 快速在酒精燈火上加熱固定（注意：切忌過熱處理）
12． 加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
13． 室溫下孵育5分鐘
14． 小心抽去清理液
15． 加上xx微升HEPENGBIO染色工作液在載玻片上，蓋上蓋玻片
16． 在室溫下，暗室里孵育5分鐘
17． （選擇步驟）移去蓋玻片，小心抽去染色液
18． （選擇步驟）小心加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
19． （選擇步驟）小心抽去清理液
20． 封片處理
21． 置于熒光顯微鏡下觀察染情況（400至1000倍放大倍數）：激發波長485nm，散發波長500nm
胞漿內或細胞外呈現點狀、桿狀、散粒、纖絲狀等綠色熒光
二、懸浮細胞培養檢測
1． 將待測懸浮細胞（1 X 105總量）移入到15毫升錐形離心管
2． 放進臺式離心機離心15分鐘，速度為1000g
3． 小心抽去上清液
4． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
5． 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6． 小心抽去上清液
7． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
8． 移取20微升混勻液到潔凈的載玻片上
9． 放進37培養箱孵育10分鐘，使其晾干
10． 快速在酒精燈火上加熱固定（注意：切忌過熱處理）
11． 加上50微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
12． 室溫下孵育5分鐘
13． 小心抽去清理液
14． 加上xx微升HEPENGBIO染色工作液在載玻片上，蓋上蓋玻片
15． 在室溫下，暗室里孵育5分鐘
16． （選擇步驟）移去蓋玻片，小心抽去染色液
17． （選擇步驟）小心加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
18． （選擇步驟）小心抽去清理液
19． 封片處理
20． 置于熒光顯微鏡下觀察染色況（400至1000倍放大倍數）：激發波長485nm，散發波長500nm
胞漿內或細胞外呈現點狀、桿狀、散粒、纖絲狀等綠色熒光
注意事項
1． 本產品為20次操作
2． 操作時須戴手套
3． 操作時，嚴格無菌操作
4． 染色時，避免光照
5． 細胞染色前后的清洗過程中，小心操作
6． 陽性圖像可見綠色發亮的細小點狀、桿狀等染色；標準**染色見下圖：
細胞培養**污染定性熒光檢測試劑盒-產品說明書中文版
7． 如果有**和酵母污染，可見較大的胞體染色
8． 如果為細胞碎片，可見不規則染色
9． 本公司提供系列細胞培養污染檢測試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定熒光清晰
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